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大鼠大豆苷元(Daidzein)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
BS-8567大鼠大豆苷元(Daidzein)ELISA試劑盒
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，專(zhuān)用于定量檢測(cè)大鼠血漿、血清或組織勻漿等生物樣本中的大豆苷元(Daidzein)含量。大豆苷元是一種天然異黃酮類(lèi)化合物，具有抗氧化、抗炎及調(diào)節(jié)免疫等生物活性，廣泛存在于豆科植物中，其含量檢測(cè)對(duì)藥理學(xué)研究和營(yíng)養(yǎng)評(píng)估至關(guān)重要。本試劑盒基于抗原-抗體特異性結(jié)合原理，通過(guò)酶標(biāo)信號(hào)放大實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測(cè)，適用于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)分析。
試劑盒組成
預(yù)包被微孔板：96孔(12條×8孔)，板條可拆卸，包被有大豆苷元特異性抗體。
標(biāo)準(zhǔn)品：6個(gè)濃度梯度(0.13–61.02 ng/mL)，凍干粉狀，臨用前用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶。
酶標(biāo)記物：辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)抗原，棕色避光保存。
顯色底物：TMB(四甲基聯(lián)苯胺)溶液，無(wú)色透明液體。
終止液：2M硫酸溶液，用于終止反應(yīng)。
洗滌液：20×濃縮緩沖液，需用去離子水稀釋后使用。
樣本稀釋液：用于調(diào)節(jié)樣本濃度至檢測(cè)范圍。
封板膜：2張，用于微孔板密封。
說(shuō)明書(shū)：1份。
儲(chǔ)存條件
未開(kāi)封試劑盒：2–8°C避光保存，有效期12個(gè)月。
開(kāi)封后：標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)記物及顯色底物需分裝凍存(-20°C)，避免反復(fù)凍融;微孔板干燥密封保存。
禁止凍結(jié)濃縮洗滌液，防止結(jié)晶析出。
樣本處理
血漿/血清樣本：采集后立即離心(3000 rpm，10分鐘)，取上清液，-80°C保存。避免溶血。
組織勻漿：稱取組織，加入生理鹽水(1:9 w/v)勻漿，離心取上清液。
注意事項(xiàng)：樣本中大豆苷元可能以結(jié)合態(tài)存在，建議使用β-葡萄糖醛酸酶水解以提高檢測(cè)靈敏度。樣本渾濁時(shí)需離心(5000 rpm，10分鐘)或過(guò)濾(0.22 μm膜)。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 試劑準(zhǔn)備
洗滌液：用去離子水將20×濃縮液稀釋至1×(如10 mL濃縮液+190 mL水)。
標(biāo)準(zhǔn)品梯度：用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將凍干標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶，梯度稀釋至0.13、0.39、1.17、3.51、10.53、61.02 ng/mL。
樣本稀釋?zhuān)河脴颖鞠♂屢簩⒋郎y(cè)樣本稀釋至檢測(cè)范圍內(nèi)(建議預(yù)實(shí)驗(yàn)確定稀釋倍數(shù))。
2. 加樣與孵育
每孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本(設(shè)空白孔僅加樣本稀釋液)。
每孔加入50 μL酶標(biāo)記物，輕搖混勻。
37°C避光孵育60分鐘。
3. 洗滌
棄去孔內(nèi)液體，每孔加入350 μL洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次，拍干。
4. 顯色與終止
每孔加入100 μL顯色底物，37°C避光孵育15分鐘。
每孔加入100 μL終止液，輕搖混勻。
5. 測(cè)定
立即用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，參考波長(zhǎng)630 nm。
結(jié)果計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，擬合四參數(shù)邏輯曲線(推薦使用專(zhuān)業(yè)軟件)。
樣本濃度計(jì)算：根據(jù)樣本OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，乘以稀釋倍數(shù)得到實(shí)際濃度。
性能參數(shù)
靈敏度：檢測(cè)限0.13 ng/mL。
精密度：板內(nèi)變異系數(shù)(CV)<10%，板間CV<15%。
回收率：80–120%(驗(yàn)證方法：加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn))。
線性范圍：0.13–61.02 ng/mL，相關(guān)系數(shù)r2≥0.98。
特異性：與類(lèi)似結(jié)構(gòu)化合物(如染料木素)交叉反應(yīng)率<5%。
注意事項(xiàng)
操作規(guī)范：避免酶標(biāo)記物和顯色底物接觸金屬離子;顯色后30分鐘內(nèi)測(cè)定，防止信號(hào)衰減。
質(zhì)量控制：每批次實(shí)驗(yàn)需包含標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣本(推薦高、中、低濃度)。
安全防護(hù)：終止液含強(qiáng)酸，需佩戴手套和護(hù)目鏡操作。
廢物處理：含酶廢物需經(jīng)滅活處理后再丟棄。
常見(jiàn)問(wèn)題解答
信號(hào)偏低：檢查孵育時(shí)間或溫度是否不足;確認(rèn)洗滌步驟是否充分。
高背景值：可能因洗滌不凈或樣本基質(zhì)干擾，建議增加洗滌次數(shù)或優(yōu)化樣本前處理。
標(biāo)準(zhǔn)曲線異常：復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)需充分混勻，避免氣泡影響濃度準(zhǔn)確性。
注：本產(chǎn)品僅供科研使用，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)。具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
大鼠大豆苷元(Daidzein)ELISA檢測(cè)試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。 本生試劑盒
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